High Scriptools-Quantimix Easy Probes Kit es un sistema nuevo de RT-PCR en tiempo real para la cuantificación de moldes de ARN utilizando sondas de hidrólisis (ej. Sondas TaqMan). La elevada sensibilidad y especificidad del kit es conseguida por la combinación de High SQP Retrotrascriptase y Biotools HotSplit DNA Polymerase, junto con un buffer especializado en un formato fácil de utilizar.
El kit ha sido diseñado para aportar la mayor eficiencia, precisión y sensibilidad en ensayos de RT-PCR cuantitativa. Con este fin, dos enzimas de alto potencial, una retrotranscriptasa termoestable y una ADN polimerasa con actividad hot start, son las encargadas de llevar a cabo las dos reacciones de la RT-PCR. La síntesis de ADNc y la PCR ocurren secuencialmente en un tubo único utilizando un buffer de reacción común formulado para garantizar el anillamiento de primers específicos.
El High Scriptools-Quantimix Easy Probes Kit proporciona un método rápido y simple que permite la síntesis y amplificación del ADNc en tiempo real, en un mismo tubo. Los reactivos para ambas reacciones se incorporan simultáneamente en el vial de reacción reduciendo el tiempo de manipulación y los riesgos de contaminación sin comprometer la eficiencia o la sensibilidad del ensayo. Para su utilización simplemente es necesario incorporar a la master mix, la cantidad deseada de primers, sondas y molde de ARN.
Este kit ha sido optimizado con ARN de diferentes orígenes incluyendo ARNs virales: ARN del virus de la Hepatitis C, ARN del virus del SIDA, ARN del virus de la gripe A (H1N1), entre otros.
REACTIVOS INCLUIDOS EN EL KIT
El sistema contiene reactivos suficientes para un número de reacciones, de 50µl cada una, de qRT-PCR en un tubo.
- High SQP Master Mix: Se trata de una Master Mix 2X fácil de utilizar formulada para la optimización de reacciones de RT-PCR en tiempo real en un tubo. El buffer de reacción incluido en la mezcla ha sido adaptado para permitir el análisis cuantitativo de la qRT-PCR utilizando sondas específicas de secuencia. La mezcla incluye: Biotools HotSplit DNA Polymerase, dNTPs, MgSO4, y Buffer de Reacción.
- High SQP Retrotranscriptase: Es una nueva retrotranscriptasa que carece de actividad RNasa H, presenta gran afinidad por el ARN y es activa en un amplio rango de temperatura. La retrotranscriptasa es proporcionada en un tubo independiente.
- 100 mM MgSO4 Solution: Utilizado para ensayos que requieran una concentración de iones magnesio superior a 6mM.
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