High Scriptools-Quantimix Easy Kit es un sistema nuevo de RT-PCR en tiempo real para la cuantificación de secuencias específicas a partir de muestras de ARN. Este kit utiliza dos enzimas: High SQ Retrotrascriptase y Biotools HotSplit DNA Polymerase para la cuantificación de moldes de ARN.
El kit ha sido diseñado para aportar la mayor eficiencia y sensibilidad en ensayos de RT-PCR cuantitativa utilizando fluoróforos intercalantes. Con este fin, dos enzimas de alto potencial, una retrotranscriptasa termoestable y una ADN polimerasa con actividad hot start, son las encargadas de llevar a cabo las dos reacciones de la RT-PCR. La síntesis de ADNc y la PCR ocurren secuencialmente en un tubo único utilizando un buffer de reacción común formulado para garantizar el anillamiento de los primers específicos.
La señal de fluorescencia generada por la incorporación del fluoróforo intercalante al ADN es monitorizada al final de cada ciclo de amplificación.
El High Scriptools-Quantimix Easy Kit es un método rápido y simple que permite la síntesis y amplificación del ADNc en tiempo real, en un tubo único. Los reactivos para ambas reacciones se incorporan simultáneamente en el vial de reacción reduciendo el tiempo de manipulación y los riesgos de contaminación sin comprometer la eficiencia o la sensibilidad del ensayo.
REACTIVOS INCLUIDOS EN EL KIT
El sistema contiene reactivos suficientes para un número de reacciones, de 50µl cada una, de RT-PCR en un tubo.
- High SQ Master Mix: Se trata de una Master Mix 2X fácil de utilizar formulada para la optimización de reacciones de RT-PCR en tiempo real en un tubo. La mezcla incluye: Biotools HotSplit DNA Polymerase, dNTPs, MgSO4, y Buffer de Reacción.
- High SQ Retrotranscriptase: Es una nueva retrotranscriptasa que carece de actividad RNasa H, presenta gran afinidad por el ARN y es activa en un amplio rango de temperatura.
- qPCR Astringent: Se utiliza para incrementar la sensibilidad y especificidad en ensayos de qRT-PCR. Su utilización es opcional.
- 100 mM MgSO4 Solution: Utilizado para ensayos que requieran una concentración de iones magnesio superior a 6mM.
El fluoróforo intercalante no se proporciona con el kit
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